مهارکننده RNase
این پروتئین اسیدی به طور موثر طیف گستردهای از ریبونوکلئازها را مهار میکند. این آنزیم برای جلوگیری از تخریب RNA در کاربردهایی مانند سنتز cDNA، RT-PCR، رونویسی/ترجمه در شرایط آزمایشگاهی و خالصسازی RNA استفاده میشود که از یک سویه نوترکیب E. coli که حاوی ژن RNase Inhibitor است، خالصسازی شده است.
• مهار کننده قوی ریبونوکلئازهای A، B و C.
• مناسب برای کاربردهای مختلف مانند سنتز cDNA، RT-PCR و رونویسی/ترجمه در شرایط آزمایشگاهی.
• فعال در تمام بافرهای رایج.
• غلظت توصیهشده برای محافظت از RNA: 1-2 واحد به ازای هر میکرولیتر از مخلوط واکنش.
• دمای بهینه فعالیت: ۳۷ درجه سانتیگراد.
• غیرفعالسازی در دمای ۶۵ درجه سانتیگراد به مدت ۲۰ دقیقه.
• فاقد آلودگی با DNA باکتریایی.
- از ذوب و انجماد مکرر خودداری کنید
- در ۲۰- درجه سانتیگراد و دور از نور نگهداری شود
- بهترین زمان مصرف تا ۲۴ ماه پس از تاریخ تولید
- آمادهسازی واکنش:
- تمام مواد را روی یخ ذوب کرده و به خوبی مخلوط کنید.
- مخلوط واکنش را به شرح زیر آماده کنید:
| جزء | حجم (میکرولیتر) | غلظت نهایی |
|---|---|---|
| dNTP Mix (10 mM هر dNTP) | 2 | 1 mM (هر dNTP) |
| RNase Inhibitor (40 U/µl) | 0.5 | 1 U/µl |
| پرایمر (Oligo (dT)12–18 یا Hexamer یا پرایمر اختصاصی) | 0.5-1 | 0.25-1.25 µM |
| RNA الگو | 0.1–1 میکروگرم | – |
| Reverse Transcriptase (200 U/µl) | 1 | 10 U/µl |
| بافر 5X RT | 4 | 1X |
| آب عاری از نوکلئاز | متغیر | – |
| حجم کل | 20 میکرولیتر | – |
- انکوباسیون:
- برای پرایمر Hexamer: ۱۰ دقیقه در ۳۰ درجه سانتیگراد، سپس ۲۰-۶۰ دقیقه در ۵۰-۵۵ درجه سانتیگراد.
- برای پرایمر Oligo (dT) یا پرایمر اختصاصی: ۲۰-۶۰ دقیقه در ۵۰-۵۵ درجه سانتیگراد.
- غیرفعالسازی آنزیم:
- نمونه را در دمای ۹۹ درجه سانتیگراد به مدت ۵ دقیقه حرارت دهید.
- ذخیرهسازی:
- محصول cDNA را در ۲۰- درجه سانتیگراد نگهداری کنید یا برای مراحل بعدی مانند PCR یا qPCR استفاده کنید.
نقد و بررسیها
هنوز بررسیای ثبت نشده است.