آنزیم و بافر واکنش Z-Phusion با صحت بالا
کیت PCR حاوی آنزیم Phusion High-Fidelity DNA Polymerase و بافر واکنش (2X) برای تکثیر DNA با دقت و سرعت بالا. مناسب برای تکثیر قطعات بزرگ (تا 7.5 کیلوباز)، کلونینگ، توالییابی و جهشزایی
• افزایش صحت تکثیر تا ۵۰ برابر نسبت به Taq DNA Polymerase
• سرعت بالا با زمان Extension کوتاه (۱۵-۳۰ ثانیه بر کیلوباز)
• دارای دمین Sso7d برای افزایش پایداری اتصال DNA-آنزیم و بهبود بازدهی
• مناسب برای تکثیر قطعات بزرگ (تا ۷.۵ کیلوباز)
• پایداری حرارتی بالا و مقاومت در دمای بالا
• فعالیت ۵´→ ۳´ پلیمرازی و ۳´→ ۵´ اگزونوکلئازی
• مناسب برای تکثیر قطعات با درصد GC بالا و ساختار ثانویه پیچیده
• تولید محصول بیشتر با مقدار آنزیم کمتر
• کاهش زمان آمادهسازی
• فاقد آلودگی DNA باکتریایی
- از ذوب و انجماد مکرر خودداری کنید
- در ۲۰- درجه سانتیگراد و دور از نور نگهداری شود
- بهترین زمان مصرف تا ۲۴ ماه پس از تاریخ تولید
- آمادهسازی واکنش:
- مخلوط اصلی، پرایمرها و نمونه را روی یخ ذوب کنید.
- مخلوط واکنش را به شرح زیر آماده کنید:
| جزء | حجم (میکرولیتر) | غلظت نهایی |
|---|---|---|
| پرایمر F (X µM) | X | 0.5 µM |
| پرایمر R (X µM) | X | 0.5 µM |
| بافر واکنش (2X) | 10 | 1X |
| آنزیم Phusion | 1 | 0.02 U/µl |
| DNA الگو | متغیر | 10–500 نانوگرم |
| آب درجه PCR | متغیر | – |
| حجم کل | 20 میکرولیتر | – |
- لولهها را 10 ثانیه سانتریفیوژ کنید.
- شرایط سیکلینگ PCR:
پروتکل سهمرحلهای:
| دما (°C) | مدت زمان | تعداد سیکلها |
|---|---|---|
| 98 | 30 ثانیه | 1 |
| 98 | 5–10 ثانیه | 40-45 |
| 50-65 | 10–30 ثانیه | 40-45 |
| 72 | 15–30 ثانیه/کیلوباز | 40-45 |
پروتکل دومرحلهای:
| دما (°C) | مدت زمان | تعداد سیکلها |
|---|---|---|
| 98 | 30 ثانیه | 1 |
| 98 | 5–10 ثانیه | 40-45 |
| 72 | 15–30 ثانیه/کیلوباز | 40-45 |
توجه: دمای اتصال معمولاً 3 درجه بالاتر از Tm پرایمر با Tm پایینتر انتخاب شود.
نقد و بررسیها
هنوز بررسیای ثبت نشده است.